Влияние активирующих мутаций V600 гена B-RAF на способность клеток меланомы к аутофагии

Цель работы. исследована взаимосвязь статуса гена B-RAFсо степенью активации аутофагии в клеточных линиях меланомы человека in vitro. Материалы и методы. В работе были использованы 12 клеточных линий меланом человека. Наличие мутаций гена B-RAF в клетках определяли методом ПЦР, уровень экспрессии мРНк гена Beclin1 - методом оТ-ПЦР. Анализ экспрессии и аккумуляции белка LC3B, специфически ассоциированного с мембранами аутофагосом, проводили иммуноцитохимическим методом. Результаты. Среди исследованных клеточных линий 7 имели активирующие мутации в гене B-RAF. Базальный уровень экспрессии мРНк гена Beclin1 регистрировали в клетках всех исследованных линиях меланомы. Его величина варьировала в широком диапазоне от 0,15 до 1,16 о.е. Голодание клеточных линий приводило к увеличению экспрессии мРНк Beclin1 в клетках B-RAF\ а в B-RAF⁶⁰⁰ клеточных линиях он практически не менялся. однако противоопухолевый препарат темозоломид увеличивал количество аутофагосом в клетках меланомы человека с разным статусом B-RAF. Выводы. Активирующие мутации в гене B-RAFмогут влиять на уровень аутофагии в клетках меланомы in vitro. изучение механизмов этого процесса позволит разработать новые факторы предсказания лекарственной устойчивости меланомы и выявить оригинальные мишени для противоопухолевой терапии.

аутофагия, меланома, мутации в гене B-RAF, химиорезистентность, autophagy, melanoma, B-RAF gene mutations, chemoresistance

1. Soengas M.S., Lowe S.W. Apoptosis and melanoma chemoresistance. Oncogene. 2003, v. 22 (20), p. 3138-3151.

2. Hocker T.L., Singh M.K., Tsao H. Melanoma genetics and therapeutic approaches in the 21st century: moving from the benchside to the bedside. J. Invest. Dermatol. 2008, v. 128, p. 2575-2595.

3. Wan P.T., Garnett M.J., Roe S.M. et al. Mechanism of activation of the RAF-ERK signaling pathway by oncogenic mutations of B-RAF. Cell. 2004, v. 116, p. 855-867.

4. Eskelinen E. To be or not to be? Examples of incorrect identification of autophagic compartments in conventional transmission electron microscopy of mammalian cells. Autophagy. 2008, v. 4, p. 257-260.

5. Sheridan C., Brumatti G., Martin S.J. Oncogenic B-RafV600E inhibits apoptosis and promotes ERK-dependent inactivation of Bad and Bim. J. Biol. Chem. 2008, v. 283 (32), p. 2212822135.

6. Corcelle E., Nebout M., Bekri S. et al. Disruption of autophagy at the maturation step by the carcinogen lindane is associated with the sustained mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase activity. Cancer Res. 2006, v. 66, p. 6861-6870.

7. Dong J., Phelps R.G., Qiao R. et al. BRAF oncogenic mutations correlate with progression rather than initiation of human melanoma. Cancer Res. 2003, v. 63, p. 3883-3885.

8. Shintani T, Klionsky D.J. Autophagy in health and disease: a double-edged sword. Science. 2004, v. 306 (5698), p. 990-995.

9. Liang X.H., Yu J., Brown K., Levine B. Beclin 1 contains a leucine-rich nuclear export signal that is required for its autophagy and tumor suppressor function. Cancer Res. 2001, v. 61 (8), p. 3443-3449.

10. Maddodi N. et al. Induction of Autophagy and Inhibition of Melanoma Growth In Vitro and In Vivo by Hyperactivation of Oncogenic BRAF. J. Invest. Dermatol. 2010, v. 130 (6), p. 1657-1667.

11. Deng R., Li W, Guan Z. et al. Acetylcholinesterase expression mediated by c-Jun-NH2-terminal kinase pathway during anticancer drug-induced apoptosis. Oncogene. 2006, v. 25, p. 7070-7077.

12. Eich M., Roos W.P., Nikolova T, Kaina B. Contribution of ATM and ATR to the resistance of glioblastoma and malignant melanoma cells to the methylating anticancer drug temozolomide. Mol. Cancer Ther. 2013, Aug 19.

13. Armstrong J.L., Corazzari M., Martin S. et al. Oncogenic B-RAF signaling in melanoma impairs the therapeutic advantage of autophagy inhibition. Clin. Cancer Res. 2011, v. 17 (8), p. 2216-2226.

14. Sudipa June Chatterjee and Siyaram Pandey. Chemo-resistant melanoma sensitized by tamoxifen to low dose curcumin treatment through induction of apoptosis and autophagy. Cancer Biology & Therapy. 2011, v. 11, p. 2, 216-228.

15. Giatromanolaki A., Sivridis E., Bechrakis N.E. et al. Phosphorylated pVEGFR2/KDR receptor expression in uveal melanomas: relation with HIF2a and survival. Clin. Exp. Metastasis. 2012, v. 29 (1), p. 11-17.

16. Han C., Sun B., Wang W et al. Overexpression of microtubule- associated protein-1 light chain 3 is associated with melanoma metastasis and vasculogenic mimicry. Tohoku J. Exp. Med. 2011, v. 223 (4), p. 243-251.

17. Miracco C., Cosci E., Oliveri G. Protein and mRNA expression of autophagy gene Beclin 1 in human brain tumors. Int. Journ. of Oncology. 2007, v. 30, p. 429-436.